
ER-Tracker Green內質網綠色熒光探針產品簡介
ER-Tracker探針是一系列具有細胞膜透過性,對活細胞內質網具有高度選擇性的探針,不像傳統(tǒng)的DiOC6(3),該系列探針幾乎不對線粒體著色,且在較低濃度即可實現(xiàn)對內質網的染色,且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細胞染色后用醛固定,可以部分保留活細胞的染色特征。
本品為ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide),由綠色熒光染料BODIPY® FL和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成,其Ex= 504 nm,Em= 511nm。格列ben脲(Glibenclamide, glyburide),一種常用降血糖藥物,在胰島β細胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列ben脲高度結合ATP-敏感型K+通道的磺脲受體,且本受體富集存在內質網上,因此適合用作內質網熒光探針。
本品為溶于DMSO的1 mM 濃度ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)儲存液,推薦工作濃度為~1 μM。我司還提供了ER-Tracker Green 稀釋液,使ER-Tracker Green的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋,每10µl可以配制10ml ER-Tracker Green工作液;按照1:3000的比例稀釋,每10µl可以配制30ml ER-Tracker Red工作液。
產品組成
名稱 編 號 |
FS1343-20ul |
FS1343-100ul |
Storage |
ER-Tracker Gree內質網紅色熒光探針 | 20ul | 20ul | -20℃干燥 |
ER-Tracker Green稀釋液 | 60ml | 250ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | ||
基本特性
分子式(Formula):C37H42BClF2N6O6S
分子量(Molecular Weight):783.1
Ex/Em:504/511 nm

ER-Tracker Green的化學結構式(A)和激發(fā)、發(fā)射光譜圖(B)。
濾片(Filter):FITC
外觀(Appearance):液體
溶解性:溶于DMSO(1mM)
運輸儲存條件:冰袋運輸。≤-20℃避光干燥保存,至少六個月有效。避免反復凍融。
ER-Tracker Green內質網綠色熒光探針使用方法(以下步驟僅做參考,具體請根據(jù)實際情況或參考文獻資料來調整。)
使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。
1、ER-Tracker Green內質網綠色熒光探針工作液的配制:
(1).取少量ER-Tracker Green按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Green 稀釋液中。例如取1μl ER-Tracker Green加入到1ml ER-Tracker Green 稀釋液中。混勻后即為ER-Tracker Green工作液。
(2).ER-Tracker Green工作液使用前需37℃預溫育。
[注]:工作液中ER-Tracker Green的濃度可以根據(jù)實際情況進行適當調整,推薦的稀釋比例調整范圍為1:1000-1:3000。為降低背景,在染色效果可以接受的范圍內,建議盡量使用較低濃度的ER-Tracker Green。
2、內質網的熒光標記:
(1).去除細胞培養(yǎng)液,用適量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks' Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)(CAT#FS0395)洗滌生長在蓋玻片上的細胞。
(2).去除洗滌液,加入步驟1配制好的并37℃預溫育的ER-Tracker Green染色工作液,與細胞37℃共孵育15-30分鐘。
(3).去除ER-Tracker Green染色工作液,用細胞培養(yǎng)液洗滌細胞1-2次。
(4).隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到內質網呈明亮的強熒光染色。
(5).如果經ER-Tracker Green染色后的細胞需要進行固定,可以使用4%甲醛37℃固定2分鐘。固定后用適當?shù)南礈煲合礈?/span>2-3次,每次5分鐘,隨后可以進行復染或滴加適當?shù)目篃晒獯銣绶馄海詈蠓馄^察。
[注]:ER-Tracker Green染色的細胞不能用Triton X-100通透,Triton X-100通透處理會導致ER-Tracker Green的熒光染色消失。
注意事項
(1)熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
(2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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常見問題及解答FAQ
Q: 請問HBSS 里面的鈣鎂離子在里面起到什么作用?
A: 有利于維持細胞狀態(tài),利于后續(xù)的染色。
Q: 請問固定后的死細胞還能染上嗎?
A: 該探針主要染的是活細胞的內質網,固定樣本基本染不上色。
Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎?
A: 活細胞的染色,不需要加抗熒光淬滅封片液。
Q: 固定后的熒光還會淬滅么?或者說可以維持多長時間?
A: ER-Tracker Red 按照后附的使用說明染色后,用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留, 熒光均會有淬滅的現(xiàn)象的。具體的熒光維持時間這邊沒有具體數(shù)據(jù)可參考。
Q: 請問 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同時染還是分開依次染,染完后熒光可持續(xù)多久(也就是在多長時間內還可以檢測)?
A: 建議分開依次染色,熒光均存在淬滅的現(xiàn)象,染色完建議盡快在1-2h內完成檢測。